血清總鐵結合能力（TIBC）檢測試劑盒說明書
可見分光光度法
注意：本產(chǎn)品試劑有所變動，請注意并嚴格按照該說明書操作。
貨號：BC2860
規(guī)格：50T/48S
產(chǎn)品組成：使用前請認真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

溶液的配制：

1. 試劑四：臨用前根據(jù)用量將A液和B液按1:1混合，當天用完；

2. 標準品：臨用前加0.9mL蒸餾水溶解，得到40μmol/mLFeSO₄溶液，2-8℃可保存8周。

產(chǎn)品說明：
血清總鐵結合能力指血清轉(zhuǎn)鐵蛋白可結合鐵的能力，其含量高低與缺鐵性貧血、急性肝炎等疾病的發(fā)生密切相關。
Fe²⁺與菲洛嗪反應形成紫紅色化合物，在562nm處有特征吸收峰。堿性條件下，血清轉(zhuǎn)鐵蛋白可以與Fe³⁺結合，可以被還原成Fe²⁺，此時吸光度A1與未結合Fe³⁺數(shù)量正相關；酸化后，轉(zhuǎn)鐵蛋白結合的Fe³⁺釋放，并且進一步被還原成Fe²⁺，此時吸光度A2與總Fe³⁺數(shù)量正相關。A2減A1與TIBC呈正比。


技術指標：
低檢出限：第一次測量的檢出限為0.0002 μmol/mL；第二次測量的檢出限為0.0017 μmol/mL。
線性范圍：第一次測量的線性范圍為0.00195-0.5 μmol/mL；第二次測量的線性范圍為0.00195-0.5 μmol/mL。
注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、臺式離心機、1mL玻璃比色皿、EP管、蒸餾水。
操作步驟：

• 測定步驟（可適當調(diào)整待測樣本量，具體比例可以參考文獻）

1、標準溶液的稀釋：取10μL 40μmol/mLFeSO₄標準液，加入1590μL蒸餾水，充分混勻，配制成0.25μmol/mL標準液使用，現(xiàn)用現(xiàn)配。（實驗中每管需要100μL，為減小實驗誤差，故配制大體積。）
2、分光光度計預熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至562nm，蒸餾水調(diào)零。
3、試劑一37℃預熱10min。
4、樣本測定（在EP管中加入下列試劑）

二、血清總鐵結合力計算
總鐵結合能力定義：37℃條件下，每升血清結合Fe³⁺的μmol數(shù)。
總鐵結合能力TIBC（μmol/L）=C標準×ΔA2測÷ΔA2標-C標準×ΔA1測÷ΔA1標
=250×（ΔA2測÷ΔA2標-ΔA1測÷ΔA1標）
C標準：標準液濃度，0.25μmol/mL=250μmol/L。
注意事項：
1. A1測小于0.1時，建議將樣本用蒸餾水適當稀釋再測定，注意計算公式里乘以稀釋倍數(shù)。
2. 試劑二、試劑四有一定的毒性，操作時請做好防護措施。
實驗實例：

1. 取100μL用蒸餾水稀釋4倍的駱駝血清，按照測定步驟操作，測得計算ΔA1測=A1測-A1空=0.356，ΔA1標=A1標-A1空=0.669，ΔA2測=A2測-A2空=0.819，ΔA2標=A2標-A2空=0.519，計算總鐵結合能力得：總鐵結合能力TIBC（μmol/L）=250×（ΔA2測÷ΔA2標-ΔA1測÷ΔA1標）×4=1045.897 μmol/L。

2. 取100μL用蒸餾水稀釋8倍的鵝血清，按照測定步驟操作，測得計算ΔA1測=A1測-A1空=0.588，ΔA1標=A1標-A1空=0.669，ΔA2測=A2測-A2空=0.797，ΔA2標=A2標-A2空=0.519，計算總鐵結合能力得：總鐵結合能力TIBC（μmol/L）=250×（ΔA2測÷ΔA2標-ΔA1測÷ΔA1標）×8=1313.443 μmol/L。

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